某同學在學完菊花的組織培養內容之后，決定利用課余時間去實踐這項技術培養出美麗的菊花來美化教室的環境。 (1)制備MS固體培養基時，一般使用4℃保存的配制好的培養母液來制備。配制時應先根據_____和_____計算各種母液的用量以及_____和_____的用量。整個過程的操作順序是：_______________。 (2)MS培養基含有_____多種營養成分。其中__________6種屬于大量元素；__________9種屬于微量元素，能源物質是__________。由于菊花的莖段組織培養比較容易，所以不必加_____。 (3)將分裝好的培養基連同培養器械一起進行_____滅菌。 (4)選取菊花的外植體，用_____的乙醇和_____的次氯酸鈉溶液來消毒，消毒時間不宜過長。 (5)接種時要特別注意，每瓶接種_____個外植體。蓋上封口膜，溫度控制在_____，并且每日用日光燈照_____。 (6)若干天后發現有的錐形瓶長出可愛的菊花幼苗，有的錐形瓶培養失敗，還長出許多雜菌菌落。試分析其可能的原因。 

 【精講精析】在配制MS固體培養基時，先確定培養基的體積，根據母液的濃縮倍數計算用量，并加蒸餾水稀釋。培養基的成分應包括：瓊脂(作為凝固劑)、蔗糖(作為碳源)、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1 000毫升，調節適宜的pH，分裝滅菌后備用。在菊花組織培養中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養比較容易。滅菌采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。組成 生物體的元素大約有20多種，其中屬于大量元素的有N、P、K、Ca、Mg、S等，屬于微量元素的有Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl等。選取了材料以后要進行消毒，先在70%的乙醇中浸泡10min，再放入5%的次氯酸鈉溶液中浸泡5min，然后用另一5%的次氯酸鈉溶液浸泡5min，較后在超凈臺中用無菌水清洗。利用無菌技術將外植體接種到錐形瓶中，蓋上封口膜，放在18℃～25℃的環境中培養，保持每天光照不少于14.5h。若外植體消毒不徹底或是培養基滅菌不徹底，或操作過程中混入雜菌，都會使實驗失敗，得不到植株幼苗。

  答案：(1)要配制的培養基的體積   各種母液的濃縮倍數  瓊脂   蔗糖   計算→稱量→融化→加母液→定容→調pH→分裝→滅菌  

  (2)20   N、P、K、Ca、Mg、S  Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl   蔗糖   植物激素 

  (3)高壓蒸汽   

  (4)體積分數為70%   5%   

  (5)2～3    18 ℃～25 ℃   不少于14.5h   (6)外植體消毒或培養基滅菌不徹底,接種時無菌操作不規范。 

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